Diagnóstico virológico de la infección por virus de la Influenza: Muestra de elección, ELISA, IFA, Inhibición de la hemaglutinación, RT-PCR; análisis serológico, otras

El diagnóstico de la gripe se puede realizar mediante los aspectos clínicos y epidemiológicos del paciente, no se requiere de una prueba específica para hacer el diagnóstico, pero es necesario realizar un diagnóstico definitivo con técnicas inmunológicas y biología molecular al momento de medicar un tratamiento antiviral o con fines epidemiológicos, detectando y clasificando las nuevas variantes del virus para prevenir y controlar la enfermedad.

Muestra de elección

Lavado bronco-alveolar, aspirados o lavados traqueales, nasofaríngeos, oro-faríngeos, hisopados nasales, nasofaríngeos y oro-faríngeos.

Diagnóstico de laboratorio

Se procede al identificar los antígenos producidos o ácido nucleico presente, para llegar al diagnóstico definitivo. La detección de anticuerpos no es recomendado por su poco valor diagnóstico. Las pruebas más usadas para determinar la presencia del virus Influenza son: ELISA, IFA, Inhibición de la hemaglutinación y RT-PCR. También existen las pruebas rápidas que comparten mucho de estos mismos principios inmunológicos, pero cuya sensibilidad es muy baja.

Diagnóstico de antígenos virales o amplificación del genoma viral

Son los métodos más utilizados debido a que se detecta rápidamente el antígeno viral, sabiendo que por otra parte la producción de anticuerpos tardan mucho más tiempo, adicionalmente pueden arrojar resultados falsos positivos debido a la presencia de anticuerpos generados por infecciones previas con el virus influenza.

• IFA (Inmunofluorescencia): Esta técnica utiliza anticuerpos monoclonales marcados con un fluorocromo que son específicos para detectar proteínas virales como la NP y M que son las que tienen poca actividad para mutar. Varios estudios demuestras que esta prueba presenta una alta sensibilidad en comparación a otras pruebas y es la más recomendada en estos casos.

• ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas): Es muy parecida a la anterior pero en este caso utiliza un anticuerpo marcado con una enzima y se revela mediante un sustrato enzimático que se muestra con un cambio de color. La enzima más usada en estas pruebas es la peroxidasa.

• IH (Inhibición de la Hemaglutinación): como se mencionó anteriormente la Hemaglutinina tiene la capacidad de aglutinar ciertos glóbulos rojos. En esta prueba inmunológica, se utilizan como componentes principales:

-Suero del paciente con posible presencia del Virus Influenza.
-Anticuerpos monoclonales extraídos de un animal previamente infectado con un tipo del virus influenza.
-Glóbulos rojos de aves (pavos).

Si los anticuerpo son capaces de unirse al virus, la hemaglutinina queda ocupada y se inhibe la aglutinación de los glóbulos rojos, de lo contrario la hemaglutinina hace que los glóbulos rojos aglutinen.

Esta prueba es utilizada para la caracterización antigénica del virus de la gripe, en otras palabras, conocer los cambios antigenicos presentes y cual es la relación con otros virus influenza, permitiendo tener conocimiento de nuevos subtipos virales para actualizar las vacunas.

• RT-PCR (Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa): se usa esta técnica de PCR debido a que se necesitan formar ADNdc a partir del ARN viral usando la enzima transcriptasa inversa. Nos permite entonces detectar la infección al identificar el virus, igualmente conocer si un mismo tipo y subtipo viral es la causa de un brote en una población o institución. Esta prueba presenta una alta sensibilidad y especificidad debido a que se utilizan regiones especificas del genoma que no mutan tan frecuentemente como lo es la proteína M. Pero si dificulta la obtención de subtipos debido a que las regiones del genoma, tanto de la H como de la N varían constantemente, por lo que se deben diseñar nuevos Primers específicos para cada virus en las corridas de RT-PCR.